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操作細胞系步驟以及小技巧,常用的方法?
更新時間:2021-06-21   點擊次數(shù):1981次

脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具,已經(jīng)研究的十分廣泛,中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體,DNA并沒有預先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經(jīng)過內(nèi)吞被導入細胞。?

 一、細胞系方法原理
細胞系方法主要包括:電穿孔法、磷酸鈣沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、病毒介導的轉(zhuǎn)染等,理想的細胞轉(zhuǎn)染方法是具有高轉(zhuǎn)染效率、對細胞的毒性作用小等,本文主要介紹細胞轉(zhuǎn)染常用的方法-脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理和操作步驟等。?

優(yōu)點: 與其它方法相比,有較高的效率和較好的重復性,它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,是目前條件下蕞方便的轉(zhuǎn)染方法之一。

二、細胞系操作步驟

(1) 細胞系培養(yǎng):取6cm細胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)

A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時,吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細胞長滿之后,提取細胞蛋白或者RNA,驗證敲減/過表達效率。

我司成立的初衷就定位于以人為本,以細胞系產(chǎn)品品質(zhì)取勝的理念,為我們國家生命科學研究做一些力所能及的工作,做一家值得尊重并受人信賴的企業(yè)!產(chǎn)品免費運輸,如出現(xiàn)運輸質(zhì)量問題,我們可以包退換貨,具有完善的庫存及供應體系以及高效穩(wěn)定的純化技術,保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。?

上海通蔚生物科技有限公司

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