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ELISA法檢測(cè)肺炎衣原體
更新時(shí)間:2011-11-09   點(diǎn)擊次數(shù):1214次

肺炎衣原體感染廣泛存在于*,以隱性感染為主。其臨床表現(xiàn)多樣,主要引起人非典型肺炎,還可引起咽炎、支氣管炎、虹膜炎、肝炎、心內(nèi)膜炎及結(jié)節(jié)性紅斑等,亦是艾滋病、白血病等疾病繼發(fā)感染的重要病原,且與冠心病的發(fā)生相關(guān),嚴(yán)重威脅人類健康。常見(jiàn)檢查方法為ELISA法檢測(cè)肺炎衣原體抗體。
[檢測(cè)方法] ELISA法

[方法學(xué)原理]


采用ELISA法,血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中,使之發(fā)生反應(yīng),然后去除未結(jié)合的抗體,加入結(jié)合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結(jié)合的抗體反應(yīng),結(jié)合的HRP與發(fā)色底物發(fā)生顏色反應(yīng)。zui后,終止底物反應(yīng),在酶標(biāo)儀上讀出光密度值。

[標(biāo)本準(zhǔn)備]

取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內(nèi)不能進(jìn)行試驗(yàn),分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。檢測(cè)時(shí),使樣本恢復(fù)至室溫。

[試劑]
1.預(yù)包被微孔板
2.陽(yáng)性對(duì)照
3.弱陽(yáng)性對(duì)照
4。陰性對(duì)照
5.標(biāo)本稀釋液
6,濃縮酶聯(lián)物
7,底物A、B
8.終止液

[儀器]
酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

[檢測(cè)步驟]
1.配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中,長(zhǎng)期可存于2—8℃環(huán)境中。
2.配制酶聯(lián)物 按1:101倍稀釋,即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定稀釋量),未用完的丟棄。
3.待試劑盒平衡至室溫后,待測(cè)標(biāo)本按1;51稀釋,即取4tA血清與200u1標(biāo)本稀釋液混合。
4.將稀釋標(biāo)本置37℃環(huán)境中20min。
5。各加100ul陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性對(duì)照及已稀釋待測(cè)標(biāo)本上清液于相應(yīng)孔中,空白對(duì)照孔加100u1標(biāo)本稀釋液,蓋好反應(yīng)板,置37℃環(huán)境中30min。
6。甩盡板中液體,每孔用200~300ul洗滌液洗5次,每次均需拍干。
7.每孔加酶聯(lián)物100~1,蓋好反應(yīng)板,置37℃環(huán)境中30min。
8.甩盡板中液體,洗5次,每次拍干。
9.加底物A、B各1滴或各50tzl,混勻,置37℃環(huán)境中15min。
10.取出,加終止液1滴,用酶標(biāo)儀450nm測(cè)其OD值。若肉眼觀察則不加終止液,直接判斷結(jié)果。

[結(jié)果判斷)
1.陰性對(duì)照平均OD值須小于0.20。
2.弱陽(yáng)性對(duì)照平均OD值須在0.20—0.65。
3.弱陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個(gè)條件時(shí),本試驗(yàn)結(jié)果可信,否則重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
4.若待測(cè)標(biāo)本孔顯色比弱陽(yáng)性對(duì)照孔深則判為陽(yáng)性,反之為陰性。但在弱陽(yáng)性對(duì)照值上下10%范圍內(nèi)再測(cè)1次,如確實(shí)高于弱陽(yáng)性對(duì)照則可判為陽(yáng)性。

[正常參考值]
肺炎衣原體抗體陰性

[注意事項(xiàng)]
1.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果須結(jié)合臨床表現(xiàn)、病史作出診斷后,方可采取適當(dāng)臨床處理。
2。試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質(zhì),但仍可能有少量標(biāo)本難以除盡干擾。因此,如某標(biāo)本多項(xiàng)IgM均為陽(yáng)性,應(yīng)考慮RF的干擾。

[臨床意義]
肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體主要引起呼吸系統(tǒng)感染。肺炎衣原體抗體的檢測(cè)主要用于肺炎衣原體肺炎的輔助診斷和肺炎衣原體感染的流行病學(xué)調(diào)查。肺炎衣原體抗體在健康成人中的陽(yáng)性率約25%~50%,而兒童陽(yáng)性率低于成人。

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