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ELISA試劑盒抗體反應(yīng)使抗原固相化
更新時(shí)間:2018-01-26   點(diǎn)擊次數(shù):2114次

ELISA試劑盒因而含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,實(shí)驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn),重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用于??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照耀(例如30W紫外燈,75cm照耀12小時(shí)),以添加其吸附性能。例如,在查看抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,ELISA試劑盒而遍及的固相載體通常不能直接與核酸。換言之,包被便是抗原或抗體到固相載體外表的進(jìn)程。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí),抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛暴露,在這種情況下,直接包被作用欠安,能夠采用直接的捕獲包被法,即先將對于該抗原的特異抗體作預(yù)包被,這以后經(jīng)過抗原。也可用親和素生物素系統(tǒng)作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參加生物素化的DNA,這種包被辦法均勻、牢固,已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
ELISA試劑盒的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體外表,可能是蛋白和聚苯乙烯外表間的疏水性部分彼此吸附,并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性;
(2)抗原或抗體可經(jīng)過共價(jià)鍵與酶銜接形成酶物,ELISA試劑盒而此種酶物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
(3)酶物與相應(yīng)抗原或抗體后,可根據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是不是有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因而,能夠按底物顯色的程度顯示實(shí)驗(yàn)成果。法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所導(dǎo)致的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,ELISA試劑盒根據(jù)現(xiàn)已使用的成果,以為法具有靈敏、特異、簡略、快速、安穩(wěn)及易于自動化操作等特色。不只適用于標(biāo)本的查看,并且由于一天以內(nèi)能夠查看幾百乃至上千份標(biāo)本,因而,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。

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