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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定標(biāo)本分解
更新時(shí)間:2015-01-28   點(diǎn)擊次數(shù):1639次

(1)標(biāo)本溶血 
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,ELISA試劑盒干擾測(cè)定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
(2)標(biāo)本受細(xì)菌污染 
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
(3)標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性;標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測(cè)定,5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,ELISA試劑盒1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
(4)標(biāo)本凝集不全
在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固,18~24h*凝固。臨床檢驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結(jié)果;這類(lèi)情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用,解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br>(5)標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定干擾作用。
通過(guò)以上的分析和總結(jié),臨床檢驗(yàn)ELISA測(cè)定中出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性等錯(cuò)誤的結(jié)果,排除ELISA試劑盒因素和操作因素,再有就是從標(biāo)本因素進(jìn)行分析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾,從而確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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